Dados técnicos
Instruções de uso de colunas/placas para dessalinização c18
Introdução ao produto
As colunas/placas de dessalinização C18 são preenchidas com uma matriz de sílica gel C18, cujo grupo funcional, octadecil, possui alta hidrofobicidade e excelentes propriedades de retenção para compostos apolares. As colunas/placas de dessalinização C18 podem adsorver moléculas de primer/oligo/DNA com DMT sem retenção de sal, resultando em produtos de primer/oligo/DNA de alta pureza.
Guia de Seleção
A BM Life Sciences oferece colunas/placas de dessalinização C18 em diversos tamanhos, e você pode escolher a coluna de dessalinização ideal com base na concentração de primer/oligo. Para processamento em lote, você pode escolher uma placa de dessalinização de 96 poços.
| Número do produto | norma | Especificações de oligonucleotídeos aplicáveis | Etapas de referência |
| SPEC18W150 | 50mg/1mL | 10 nmol - 200 nmol | Passo 5 |
| SPEC18W3100 | 100mg/3mL | 10 nmol - 600 nmol | Passo 1 |
| SPEC18W3300 | 300mg/3mL | 10 nmol - 2 .opmol | Passo 2 |
| SPEC18W61000 | 1g/6mL | 1 umol - 6 umol | Etapa 3 |
| SPEC18W9630 | Placa de 30 mg/96 poços | 5 nmol - 100 nmol | Passo 4 |
| SPEC18W9650 | Placa de 50 mg/96 poços | 10 nmol - 200 nmol | Passo 4 |
| SPE15C18W9680 | Placa de 80 mg/96 poços (placa de 1,5 ml com 96 poços) | 10 nmol - 500 nmol | Passo 5 |
| SPE23C18W9680 | Placa de 80 mg/96 poços (placa de 2,3 ml com 96 poços) | 10 nmol - 500 nmol | Passo 5 |
Observação
A coluna/placa de limpeza C18 também pode dessalinizar o produto bruto e o primer/oligo após a purificação por HPLC e PAGE, veja a etapa 5 para mais detalhes.
Reagente
Grau cromatográfico de acetonitrila
0,1 M de chá, pH 7,0
0,5 M de NaCl
Solução de lavagem (5% de acetonitrila dissolvida em 0,5 M de Nacl)
3% de ácido trifluoroacético (TFA)
Água deionizada
20% de acetonitrila
Tampão TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, pH 8,0
Passo 1
Preparação da amostra
Adicione 0,5 M de NacI à amostra de oligonucleotídeo até um volume de 2 mL.
Ativação da coluna de dessalinização
Ativação: 1 mL de acetonitrila foi usado para ativar a coluna.
Equilibrando: Balanceie a coluna com 1 mL de solução de TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Processo de limpeza
1. Passe 2 mL de solução contendo oligonucleotídeo por uma coluna de dessalinização.
2. Enxágue a coluna 2 vezes com 1 mL de solução de lavagem para remover sequências malsucedidas.
3. Enxágue a coluna 2 vezes com 1 ml de água deionizada para remover os sais.
4. Enxágue a coluna 2 vezes com 1 ml de ácido trifluoroacético a 3% para remover o DMT e observe que a camada adsorvida torna-se laranja-avermelhada; e
5. Enxágue a coluna de dessalinização duas vezes com 1 mL de água deionizada para remover o ácido trifluoroacético e os sais residuais.
6. Eluir 1ml de acetonitrila 20% e montar.
Passo 2
Preparação da amostra
Adicione 0,5 M de NacI à amostra de oligonucleotídeo até um volume de 4 mL.
Ativação da coluna de dessalinização
Ativação: 2 mL de acetonitrila foram utilizados para ativar a coluna.
Equilibrando: Balanceie uma coluna de 2 mL com 0,1 M TEAA (PH 7,0).
Processo de limpeza
1. Passe 4 mL de solução contendo oligonucleotídeo por uma coluna de dessalinização.
2. Enxágue a coluna 2 vezes com 2 ml de solução de lavagem para remover sequências malsucedidas.
3. Enxágue a coluna 2 vezes com 2 ml de água deionizada para remover os sais ;)
4. Enxágue a coluna 2 vezes com 2 ml de ácido trifluoroacético a 3% para remover o DMT; a camada de adsorção ficou laranja-avermelhada.
5. Enxágue a coluna com água desmineralizada duas vezes com 2 mL de água deionizada para remover o ácido trifluoroacético e os sais residuais.
6. Eluir 2ml de acetonitrila 20% e montar.
Etapa 3
Preparação da amostra
Adicione 0,5 M de Nac à amostra de oligonucleotídeo até um volume de 10 mL.
Ativação da coluna de dessalinização
Ativação: 5 mL de acetonitrila foram utilizados para ativar a coluna.
Equilibrando: A coluna foi balanceada com 10 mL de 0,1 m TEAA (PH 7,0).
Processo de limpeza
1. 10 mL de solução contendo oligonucleotídeos foram passados por uma coluna de dessalinização.
2. A coluna foi lavada duas vezes com 5 mL de solução de lavagem para remover sequências malsucedidas.
3. Enxágue a coluna duas vezes com 5 mL de água deionizada para remover os sais.
4. Lave a coluna duas vezes com 5 mL de ácido trifluoroacético a 3% para remover o DMT e observe que a camada de adsorção ficou laranja-avermelhada.
5. Enxágue a coluna duas vezes com 5 ml de água deionizada para remover resíduos de ácido trifluoroacético e sal.
6. Eluir 5 ml de acetonitrila 20% e coletar.
Passo 4
Preparação da amostra
Adicione 0,5 M de Nacl à amostra de oligonucleotídeo até um volume de 0,5 mL.
Ativação de placa de 96 poços
Ativação: 0,5 mL de acetonitrila foi passado por cada poço de uma placa de 96 poços.
Equilíbrio: Equilibre uma placa de 96 poços com 0,5 mL de solução de TEAA 0,1 M (pH 7,0).
Procedimento de limpeza
1. Passe 0,5 mL de solução contendo oligonucleotídeo através de uma placa de 96 poços.
2. Enxágue a placa de 96 poços 2 vezes com 0,5 mL de solução de lavagem para remover sequências ruins.
3. Enxágue a placa de 96 poços 2 vezes com 0,5 mL de água deionizada para remover os sais.
4. Lave a placa de 96 poços 2 vezes com 0,5 ml de ácido trifluoroacético a 3% para remover o DMT e observe que a camada de adsorção fica laranja-avermelhada; e
5. Enxágue a placa de 96 poços duas vezes com 0,5 mL de água deionizada para remover o ácido trifluoroacético e os resíduos de sal.
6. Eluir 0,5ml de acetonitrila 20% e coletar o material.
Passo 5
Preparação da amostra
Adicione 0,5 M Nacl à amostra de oligonucleotídeo até um volume de 1,2/2 mL.
Ativação de placa de 96 poços
Ativação: Passe 1-4 ml (0,5 mL) de acetonitrila por cada poço de uma placa de 96 poços.
Equilíbrio: Balanceie uma placa de 96 poços com 1-4 mL de 0,5 mL de solução de TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Processo de limpeza
1. Passe 0,5-2 mL de solução contendo oligonucleotídeo através de uma placa de 96 poços.
2. Enxágue a placa de 96 poços 2 vezes com 1/2 mL de solução de lavagem para remover as sequências infelizes ;)
3. Enxágue a placa de 96 poços duas vezes com 1/2 mL de água deionizada para remover os sais.
4. Lave 2 vezes a placa de 96 poços com 1/2ml de ácido trifluoroacético a 3% para remover o DMT e observe que a camada de adsorção fica laranja-avermelhada;
5. Enxágue a placa de 96 poços com 1/2 mL de água deionizada 2 vezes para remover o ácido trifluoroacético e os resíduos de sal.
6. Eluir 1/2ml de acetonitrila 20% e coletar o material.
Passo 6
Reagente
Grau cromatográfico de acetonitrila
0,05 M CHÁ, PH 7,0
2 M CHÁ, PH 7,0
Água deionizada (para dessalinização e purificação de moléculas de RNA sem RNase) 60% de acetonitrila (dissolvida em água contendo 0,5% de NH4OH)
20% de acetonitrila (para dessalinizar moléculas de DNA ou RNA após desproteção)
Tampão TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, pH 8,0
Preparação da amostra
Oligo purificado por HPLC: Adicionar uma quantidade adequada de TEAA 0,1 M aos oligos purificados por HPLC de modo que a concentração final de acetonitrila seja ≤ 5%. Oligo purificado: Dissolver os fragmentos de gel contendo o oligonucleotídeo em TEAA 0,05 M, remover os fragmentos de gel e dissolver o oligo em pelo menos 2 mL de TEAA 0,1 M.
Oligos dissolvidos em NH4OH ou AMA: Evaporar até secar e dissolver em 2 mL de TEAA 0,1 M.
Ativação da bomba de dessalinização
Ativação: 1 mL de acetonitrila foi usado para ativar a coluna.
Equilibrando: Balanceie uma coluna de 1 mL 2 M TEAA (pH 7,0).
Procedimento de dessalinização de oligos para purificação por HPLC
1. Passe a solução contendo oligonucleotídeos pela coluna de dessalinização.
2. Enxágue a coluna de dessalinização duas vezes com 1 mL de água deionizada para remover os sais.
3. Eluir através de uma coluna 1 ml de acetonitrila 60% e coletar.
Procedimento de dessalinização de oligoelementos purificados pelo método PAAG
1. Passe a solução contendo oligonucleotídeos pela coluna de dessalinização.
2. Enxágue a coluna de dessalinização duas vezes com 1 mL de água deionizada para remover os sais.
3. Eluir através de uma coluna 1 ml de acetonitrila 60% e coletar.
Procedimento para dessalinização de oligons de DNA após síntese
1. Passar a solução contendo oligonucleotídeos pela coluna de dessalinização; e
2. Enxágue a coluna TEAA 0,1 M de 1 mL duas vezes para remover sequências malsucedidas.
3. Enxágue a coluna de dessalinização duas vezes com 1 ml de água deionizada para remover os sais.
4. Passe a coluna por 1 ml de acetonitrila 20% e monte.
Procedimento de dessalinização de oligos de RNA após síntese
1. Passe a solução contendo oligonucleotídeos pela coluna de dessalinização.
2. Enxágue a coluna com 2 ml 0,1 M TEAA.
3. Enxágue a coluna com 2 mL de água livre de RNase.
4. Passe 2 ml de 20% de acetonitrila (água livre de RNase) por uma coluna, elua e colete. Armazenamento de oligonucleotídeos
Oligonucleotídeos dissolvidos em 20% de acetonitrila e armazenados a 4°C previnem o crescimento de microrganismos e são adequados para armazenamento de curto prazo.
Oligonucleotídeos em uma solução de acetonitrila a 20% (ou dissolvidos em um tampão alcalino como TE) podem ser armazenados por um longo período em temperaturas tão baixas quanto -20 °C.
Oligonucleotídeos na forma de pó liofilizado podem ser armazenados por um longo período.
Aviso
As quantidades de reagentes utilizadas são apenas recomendações e devem ser otimizadas em cada caso específico.
As quantidades de reagentes utilizadas são apenas recomendações e devem ser otimizadas caso a caso.
A coluna de dessalinização deve passar por um equilíbrio de ativação suficiente para eluir os resíduos na coluna/placa e melhorar a capacidade de ligação da coluna/placa de dessalinização. A amostragem dos oligonucleotídeos sintetizados deve ser realizada lentamente para evitar que o pó de CPG entre na coluna/placa para limpeza e contaminação cruzada.
As colunas/wafers de dessalinização C18 usam matriz de sílica, a faixa de pH aplicável é de 2 a 7, pH > 7,5 dissolve facilmente a matriz de sílica, pH
Ao usar TFA para dessalinizar DMT, preste atenção ao tempo, pois muito tempo terá o efeito de remover a purina.
Seja apegado
Colunas de síntese de fritas CPG universais da B&M Tecnologia de dessalinização e purificação rápida
Colunas de síntese de frits CPG universais da B&M Tecnologia de dessalinização e purificação rápida:
Os Frits CPG Universais da B&M são feitos de polietileno ultrapuro importado de ultra-alto peso molecular e pó CPG importado, processados por tecnologia especial, têm um bom efeito de síntese na coluna de síntese, baixa taxa de mutação e qualidade confiável do produto.
Após a conclusão da síntese no sintetizador da série Dr.Oligo/Mermade e a dissolução da amônia, o Oligo pode ser eluído diretamente para a coluna de síntese e, após a dosagem e drenagem, pode ser usado para reação de PCR de rotina diretamente, sem etapas de purificação adicionais, o que é conveniente para operar, economiza custos e tem entrega mais rápida!
As etapas específicas da operação são as seguintes:
1, colunas/placas sintéticas Synthesis B&M Universal CPG Frits 400ul, mistura de água ultrapura com 75% de acetonitrila lavada duas vezes para remover reagentes residuais sintéticos;
2, colunas/placas de amônia sintética B&M Universal CPG Frits, 90°C, 80PSI, amônia amólise 2-2,5 h;
3, coluna/placa sintética de lavagem 100% acetonitrila 400L, duas vezes;
4、90% Mistura de Água Ultrapura de Acetonitrila 400ul Coluna/Placa Sintética de Lavagem, Duas Vezes, Bombeamento Seco;
5、Volume apropriado de eluente para eluir primers em coluna/placa sintética, o eluente pode ser água ultrapura, pode ser uma mistura de água ultrapura de trietilamina a 3%, também pode ser uma mistura de água ultrapura de acetonitrila a cerca de 20%.
6、 A solução de eluição pode ser medida, dispensada, drenada, embalada e enviada.