Dados técnicos
Instruções de uso da coluna/placa de dessalinização sephadex g-25
Introdução ao produto
A coluna/placa de dessalinização Dextran G-25 utiliza principalmente a função de peneira molecular em seus compostos de polímero de gel de dextrana com estrutura em rede. Devido aos diferentes tamanhos de peso molecular das substâncias separadas, quando estas passam pelo gel G-25, as substâncias com alto peso molecular (como proteínas) são bloqueadas fora das partículas de gel e fluem para fora através do espaço entre as partículas de gel. O processo é curto e a velocidade de movimento é rápida, de modo que as substâncias com alto peso molecular fluem primeiro para fora da coluna/placa. Substâncias com baixo peso molecular (por exemplo, sais) podem penetrar nos microporos das partículas de gel. O processo é longo e lento, e substâncias com alto peso molecular levam mais tempo para fluir para fora da coluna/placa de gel, sendo finalmente lavadas e, assim, as substâncias são separadas.
Os parâmetros da mídia da série Sephadex G-25 são mostrados na tabela
| Projeto | paramétrico |
| Características | Gel branco sujo |
| Tamanho médio de partícula (seco) | 150±100μm 92,8 |
| Distribuição do tamanho das partículas （45-165μm）% | ≥80 |
| Split Range (Português) | 100-5000 |
| Faixa de Separação (Globulina) | 1000-5000 |
| Proporção de água (ml de cola úmida/g de pó seco) | 2,3-2,7 |
| Taxa de fluxo linear (0,3 MPA, cm/h) | 697,1 |
| Taxa de fluxo máxima (cm/h) | 150 |
| Solução de preservação | 0,2 M NaAc 20 por cento etanol |
| condições de armazenamento | 4°C-30°C |
O número do modelo G indica a quantidade de água absorvida por grama de gel, por exemplo, o meio de gel G-25 indica que 2,5 ml de água são absorvidos por grama de gel seco, ou seja, o coeficiente de expansão do gel, que também é o tamanho dos poros das partículas de gel.
Os meios cromatográficos da série Sephadex G-25 são amplamente utilizados para troca de tampões, dessalinização de proteínas, separação de proteínas de diferentes pesos moleculares, etc. O volume máximo de amostra para dessalinização e tamponamento pode ser de até 30% do volume do leito da coluna.
Fluxo de trabalho
1. Balanceamento do Alto-falante/Comprimido: Assim que o alto-falante/comprimido com o G-25 Sefadex pré-carregado estiver na posição vertical, equilibre a coluna/comprimido de dessalinização G-25 com um tampão de 5 a 10 vezes o volume da camada da coluna. (Observação: Tampão é o tampão desejado para substituição, por exemplo, PBS, água deionizada, etc.; tenha cuidado, controle a vazão)
2. Amostragem: Após o balanceamento da coluna/placa de gel com o tampão, pipete a amostra e adicione-a lentamente à peneira na superfície do gel. Abra a tampa inferior e deixe a amostra penetrar lentamente no gel até que fique nivelada com o mesmo. (Observação: O volume da amostra na parte inferior é geralmente de 10 a 30% do volume da camada da coluna. A viscosidade da amostra não deve ser muito alta, caso contrário, a vida útil da glândula G25 será reduzida).
3. Eluição: A amostra é eluída com um tampão de eluição após ter penetrado completamente no gel. (Observação: A vazão de amostra recomendada é de cerca de 1-2 ml/min. O volume de eluição é geralmente 1,2-2,0 vezes o volume da amostra).
4. Purificação e regeneração: Algumas proteínas são desnaturadas em solução salina, portanto pode ser necessário purificá-las lavando o leito da coluna com NaOH 0,2 M ou outro detergente não iônico.
5. Armazenamento: Após o experimento, armazene em solução de azida sódica a 0,02% ou solução de etanol a 20%.